miRNA/ circRNA/ LncRNA 相关调控分子机制研究
服务简介: miRNA对mRNA的调控机制，是通过靶向互补 mRNAs导致目的mRNA降解或翻译抑制，参与调节其下游基因的翻译过程，从而发挥其生物学功能。circRNA在细胞中一般可扮演两个角色，一方面是作为ceRNA，吸附miRNA，从而调控靶基因的转录；另一方面可以和蛋白互作而参与调控蛋白的稳定性或者其他功能。LncRNA也存在与mRNA类似的miRNAs反应元件（MREs），可竞争性结合miRNA，从而调节调节mRNA水平，也就是发挥ceRNA的作用。一般当ceRNA表达沉默时，mRNA则在miRNA介导的沉默复合体（RISC）作用下降解；而当ceRNA表达激活后，可竞争结合RISC复合物，降低miRNA抑制功能，上调靶基因的表达量。综上，我们可以搭建circRNA-miRNA-mRNA或者LncRNA-miRNA-mRNA的网络，来研究miRNA/circRNA/LncRNA的功能。
常用研究方法:
(1) 选取几对样本进行全转录组测序，筛选到感兴趣的分子
(2) 在线数据分析，获得目标分子
(3) 双荧光素酶实验：用于验证circRNA或者LncRNA是否可以作为ceRNA吸附mRNA；还可 以验证miRNA是否对mRNA有靶定作用
(4) Anti-AGO2 RIP可以同时捕捉到miRNA和circRNA/LncRNA
(5) RNA Pull-down实验可以检测circRNA/LncRNA是否可以吸附miRNA
(6) 采用RNA pulldown及Mass技术分析，获取circRNA/LncRNA互作的蛋白，按照互作蛋白网络构建流程，绘制互作蛋白网络。选取感兴趣的进行后续研究
(7) FISH共定位分析
(8) 定量PCR检测
(9) Western blot检测miRNA/circRNA或者miRNA/LncRNA的表达丰度的改变是否会影响下游靶mRNA的蛋白水平
(10) 动物实验
服务流程:
(1) 确定待研究的目的分子
(2) 细胞验证
(3) 动物体内验证
说明:
(1) 服务周期：视具体服务项目而定
(2) 如提供组织：干冰邮寄，大于0.1mg
(3) 如提供细胞: 常温邮寄活细胞1瓶（T25），瓶内充满完全培养基
费用标准: 询价
交付结果:
(1) 原始实验图片及数据
(2) 具体试验流程(包括实验步骤、主要仪器及试剂说明等)
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联系方式
全国服务热线：022-66211462 转8001
市场部：15522207257（吴经理）
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