BCA法微量蛋白浓度测定试剂盒(Micro BCA Protein Assay Kit)
产品编号:
NCTP18901
品牌:
NCT
规格:
说明书:
产品介绍
在碱性条件下,基于双缩脲反应,待测蛋白可将Cu2+还原为Cu+,Cu+进一步与BCA试剂反应,产生一种紫蓝色复合物。在波长为562nm处检测其吸收值,同时与标准曲线比对,即可计算出待测样品的蛋白浓度。BCA蛋白浓度测定因其简便、快速、灵敏及稳定性,目前已被科研人员广泛应用于蛋白质浓度测定。本试剂盒适用于微量蛋白质浓度的测定。若采用酶标板法,标准曲线的线性范围为0.5-450μg/mL。若采用分光光度法,标准曲线的线性范围为0.5-300μg/mL。
产品组成
规格\试剂名称 |
A试剂 |
B试剂 |
Cu试剂 |
PBS稀释液 |
BSA蛋白标准液 |
200T |
10mL |
10mL |
0.4mL |
3mL |
0.1mL |
500T |
25mL |
25mL |
1mL |
7.5mL |
0.25mL |
2500T |
125mL |
125mL |
5mL |
37.5mL |
1.25mL |
储存条件 |
室温 |
室温 |
室温 |
室温 |
-20℃ |
产品用法
一. 酶标仪法
1. 配制工作液:将B试剂和Cu试剂按照25:1体积配制成C试剂(两者充分混匀),将C试剂与A试剂按照1:1体积配制成工作液,充分混匀后放置室温备用(建议工作液室温放置不超过24小时)。
2. 分别将蛋白标准品0, 1, 2, 4, 6, 8, 10μL加入EP管中,分别用PBS补足至100μL体积。混匀后分别加入96孔板中(每个测定做3个平行)。
3. 稀释样品:取数个梯度稀释后的蛋白样品,使得终体积为100μL。将蛋白样品分别加入96孔板中。尽量让样品点落在标准线1/2后,以便尽可能减少误差。样品稀释
4. 检测样品蛋白浓度:每孔加入100μL配制好的BCA工作液,混匀后60℃温育60min,冷却至室温,酶标仪测定A562nm吸光度,制作标准曲线,从曲线中求出样品浓度。
二. 分光光度计法
1. 配制工作液:将B试剂和Cu试剂按照25:1体积配制成C试剂(两者充分混匀),将C试剂与A试剂按照1:1体积配制成工作液,充分混匀后放置室温备用(工作液配制的量要与测定所用的比色杯对应。每个测定要做3个平行。建议工作液室温放置不超过24小时)。
2. 稀释标准品:将BSA标准品用PBS 10倍稀释。分别将稀释后的标准品0, 2.5, 62.5, 125, 187.5,250μL加入EP管中,分别用PBS补足至250μL体积。标准曲线一般5-6个点即可。
3. 稀释样品:取数个梯度稀释后的蛋白样品,使得终体积为250μL。将蛋白样品分别加入EP管中。尽量让样品点落在标准线1/2后,以便尽可能减少误差。
4. 检测样品蛋白浓度:每孔加入250μL配制好的BCA工作液,60℃温育60min,冷却至室温后分光光度计测定A562nm吸光度。绘制标准曲线,通过标准曲线计算样品的浓度。注意:实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。
5. 标准曲线制作:在室温条件下,按说明书操作,对系列标准进行吸光度的测定,我们建议采用 5、25、50、100、125μg/mL的蛋白标准绘制标准曲线(标准品浓度过高或过低都有可能影响标准曲线的准确性,对于 5-25μg/mL 范围内的蛋白样品,要充分考虑如 EGTA、EDTA、2-ME、DTT 等干扰因素,其检测结果波动较大,标准品亦有波动,请小心精细操作)。
注意事项
1. 在检测过程请保持温度与时间恒定,以确保检测稳定性
2. BCA试剂如出现结晶沉淀,37℃温育至完全溶解后再使用,如发现细菌污染则应丢弃
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作
4. 本试剂仅作科研用途
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