BCA法蛋白浓度测定试剂盒（BCA Protein Assay Kit）
产品编号：
NCTP18902
品牌：
NCT
规格：
说明书：
产品介绍
在碱性条件下，基于双缩脲反应，待测蛋白可将Cu2+还原为Cu+，Cu+进一步与BCA试剂反应，产生一种紫蓝色复合物。在波长为562nm处检测其吸收值，同时与标准曲线比对，即可计算出待测样品的蛋白浓度。BCA蛋白浓度测定因其简便、快速、灵敏及稳定性，目前已被科研人员广泛应用于蛋白质浓度测定。本试剂盒适用于蛋白质浓度的测定。标准曲线的线性范围为0.02-2.0mg/mL。
产品组成
规格＼试剂名称 |
A试剂 |
Cu试剂 |
PBS稀释液 |
BSA蛋白标准液 |
200T |
10mL |
0.4mL |
3mL |
0.1mL |
500T |
25mL |
1mL |
7.5mL |
0.25mL |
2500T |
125mL |
5mL |
37.5mL |
1.25mL |
储存条件 |
室温 |
室温 |
室温 |
-20℃ |
产品用法
一. 酶标仪法
1. 配制工作液：将A试剂和Cu试剂按照50:1体积配制成工作液，充分混匀后放置室温备用（建议工作液室温放置不超过24小时）。
2. 分别将蛋白标准品0, 1, 2, 4, 6, 8, 10μL加入EP管中，分别用PBS补足至100μL体积。混匀后分别加入96孔板中（每个测定做3个平行）。
3. 稀释样品：取数个梯度稀释后的蛋白样品，使得终体积为100μL。将蛋白样品分别加入96孔板中。尽量让样品点落在标准线1/2后，以便尽可能减少误差。样品稀释
4. 检测样品蛋白浓度：每孔加入100μL配制好的BCA工作液，混匀后60℃温育60min，冷却至室温，酶标仪测定A562nm吸光度，制作标准曲线，从曲线中求出样品浓度。
二. 分光光度计法
1. 配制工作液：将B试剂和Cu试剂按照25:1体积配制成C试剂（两者充分混匀），将C试剂与A试剂按照1：1体积配制成工作液，充分混匀后放置室温备用（工作液配制的量要与测定所用的比色杯对应。每个测定要做3个平行。建议工作液室温放置不超过24小时）。
2. 稀释标准品：将BSA标准品用PBS 10倍稀释。分别将稀释后的标准品0, 2.5, 62.5, 125, 187.5，250μL加入EP管中，分别用PBS补足至250μL体积。标准曲线一般5-6个点即可。
3. 稀释样品：取数个梯度稀释后的蛋白样品，使得终体积为250μL。将蛋白样品分别加入EP管中。尽量让样品点落在标准线1/2后，以便尽可能减少误差。
4. 检测样品蛋白浓度：每孔加入250μL配制好的BCA工作液，60℃温育60min，冷却至室温后分光光度计测定A562nm吸光度。绘制标准曲线，通过标准曲线计算样品的浓度。注意：实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。
注意事项
1. 在检测过程请保持温度与时间恒定，以确保检测稳定性
2. BCA试剂如出现结晶沉淀，37℃温育至完全溶解后再使用，如发现细菌污染则应丢弃
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作
4. 本试剂仅作科研用途
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